Equipos de purificación para purificación de Oligo

1. Purificación por cromatografía electroforese en xel
Use cromatografía de electroforese en xel de poliacrilamida desnaturalizante para a purificación.O axente desnaturalizante é xeralmente formamida 4M ou urea 7M, a concentración de acrilamida está entre o 5-15% e a proporción de metacrilamida está principalmente entre o 2-10%.
Despois da electroforese, a posición da banda de ácido nucleico debe determinarse baixo a irradiación de luz ultravioleta, o xel que contén o ácido nucleico obxectivo é cortado, o ácido nucleico é esmagado e lixiviado, e despois a solución de lixiviación é concentrada, desalada, cuantificados e liofilizados.

2. DMT-On, purificación por HPLC
Escolla o modo DMT-On durante a síntese, o produto bruto centrifugouse e concentrouse a temperatura ambiente para eliminar o exceso de amoníaco despois da aminólise.
A separación realizouse usando unha columna C18 con acetonitrilo e ácido trietilamina-acético ao 10% (TEAA) como eluyente.Despois de completar a elución, concéntrase e despois elimínase o grupo DMT con ácido trifluoroacético.Despois da neutralización, quítanse algunhas sales e pequenas moléculas a través dun tubo cortado e, finalmente, dessalanse.

Este método pode obter un produto con maior pureza, pero é necesario prestar atención á aparición de depurinación.

3. DMT-Off, purificación por HPLC
Escolla o DMT-Off durante a síntese e o produto bruto centrifugouse e concentrouse a temperatura ambiente para eliminar o exceso de amoníaco despois da amonólise.
A separación realizouse usando unha columna C18 con acetonitrilo e ácido trietilamina-acético ao 10% en auga como eluyente.Despois de completar e cuantificar a separación, as alícuotas son liofilizadas.

Este método require un axuste coidadoso das condicións de separación e tamén pode obter moléculas diana relativamente puras.