Na síntese típica de ADN, ARN e ácidos nucleicos non naturais, o paso de Desprotección e Acoplamento xoga un papel crucial.
A etapa de Desprotección consiste en eliminar o grupo DMT do soporte sólido ou o grupo hidroxilo 5' do nucleósido anterior con ácido orgánico, e expoñer o grupo hidroxilo para a seguinte etapa de acoplamento.O ácido tricloroacético ao 3% en diclorometano ou tolueno úsase principalmente para levar a cabo a etapa de desprotección.A concentración de ácido tricloroacético e o tempo de desprotección (tempo de desbloqueo) dominan a pureza dos produtos finais.A baixa concentración e o tempo de desbloqueo insuficiente deixan ao grupo DMT sen reaccionar, que diminúen o rendemento e aumentan as impurezas non desexadas.O longo tempo de desbloqueo pode levar á despurina das secuencias sintetizadas, formando impurezas inesperadas.
O paso de acoplamento é sensible ao contido de auga dos disolventes e á humidade do aire.A concentración de auga na síntese debe ser inferior a 40 ppm, mellor menos de 25 ppm.Para manter a condición de síntese anhidra, a síntese de ácidos nucleicos debe realizarse nun ambiente de baixa humidade, polo que recomendamos ao noso cliente que utilice oEquipos de amiditas disoltas, que pode disolver a fosforamidita en po ou oleosa en acetonitrilo anhidro para evitar o contacto co aire.
Dado que a disolución das fosforamiditas é mellor en situacións sen auga, e as trampas moleculares para adsorber o resto de auga nos reactivos e amiditas, é necesario preparar oTrampas moleculares.Recoméndase 2 g para botellas de reactivos de 50-250 ml, 5 g para botellas de 250-500 ml, 10 g para botellas de 500-1000 ml e 20 g para botellas de 1000-2000 ml.
A disolución das fosforamiditas debe realizarse baixo a atmosfera inerte e a substitución dos reactivos activadores e do acetonitrilo debe rematarse a tempo.Os reactivos de tapado e oxidación deben usarse canto antes, os reactivos abertos dan menos vida útil e menos actividade durante a síntese.
Hora de publicación: 09-08-2022