A síntese de ácidos nucleicos lévase a cabo mediante o método de triglicéridos de amida siálica en fase sólida, polo cal o extremo 3' do ADN inmobilizase nun substrato en fase sólida e engádense nucleótidos na dirección 3' a 5' ata que se sintetiza o fragmento de ADN desexado. .Isto difire da síntese de ADN pola aplicación da ADN polimerase.
O extremo 3′ da primeira base está inmobilizado na CPG durante a síntese, o 5′-OH da seguinte base está protexido con di-p-tolil tritilo DMT, o grupo amino da base está protexido con ácido benzoico e o 3′. -OH actívase entón cun composto de aminofosfato.1 base do 5 5′-OH de 1 base e 3′-OH da seguinte base forman un triglicérido de fosfito, que despois se oxida con iodo a un triglicérido de fosfato, o protector da segunda base 5′-OH elimínase mediante engadindo ácido dicloroacético DM ciclos a través da adición da seguinte base, e despois da síntese elimínase o protector do 5′-OH cun ácido débil. Desconéctase o fragmento da resina sólida con hidróxido de amonio concentrado, o protector elimínase da base. con hidróxido de amonio concentrado ao quecemento, elimínase o hidróxido de amonio, seca o fragmento ao baleiro e purifícase o ácido nucleico mediante cromatografía líquida ou PAGE.
Pasos da síntese do oligo
Desbloqueo
OO grupo protector DMT do 5 extremo elimínase engadindo solución de TCA.
Activación
Mesturar o activador co monómero oligonucleótido para formar o intermedio activo do monómero oligonucleótido.
Acoplamento
O grupo hidroxilo 5-terminal reacciona co intermedio oligonucleótido activo nunha reacción de condensación antixenerativa para formar un enlace triglicérido fosfito inestable.
Tapón
A adición dun axente de tapa realiza unha reacción de tapa de acetilación con grupos hidroxilo en exceso que non están implicados na reacción de condensación.
Oxidación
A adición de solución de iodo que contén auga reacciona con enlaces fosfito inestables por oxidación para formar enlaces triglicéridos de ácido fosfórico estables.
Escisión de cianoetilo
O produto de ácido nucleico despois da síntese, coa adición de solución DEA para eliminar o grupo cianoetilo do enlace triglicérido fosfato.
Escindida e desprotección
Os fragmentos de ácido nucleico escinden do vehículo en fase sólida engadindo unha solución concentrada de hidróxido de amonio e despois quéntase para eliminar os grupos protectores dos enlaces de hidróxeno das bases.
Hora de publicación: 21-nov-2022